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比较项目 | 骆驼VHH抗体文库 | 羊驼VHH抗体文库 |
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抗原耐受量 | 高,可多种抗原混合高剂量免疫 | 较高,多种抗原混合中等免疫剂量 |
HCAb血清中球蛋白比列 | 60%~80% | 20%~30% |
中和抗体效价 | 高 | 较高 |
采血量 | 一次可采血200ml | 一次80-100ml血液 |
有效库容 | 高,免疫库108-109 | 高,免疫库107-108 |
动物成本 | 较低 | 高 |
抗原需求量 | 4-6mg,纯度>85% | 4-5mg,纯度>85% |
步骤 | 内容 | 周期 | 交付 |
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第一步:抗原准备 | 客户提供抗原或者欧宝体育app 准备抗原 | 3-4周 | 如果客户提供抗原,质量标准:1. >5mg;2. SDS-PAGE >95% |
第二步:动物免疫 | 免疫未免疫的空白骆驼 5 ml 未免疫血清 ELISA检验血清效价 | 10-12周 | 如果由于抗原毒性导致的动物死亡,需要收取一定费用 根据 ELISA结果,客户决定如何建库 |
第三步:抗体cDNA制备 | 外周血分离PBMC 提取总RNA并反转录为cDNA | 3-4周 | 提供存放在Trizol 中的PBMC 提供高保真RT-PCR制备的cDNA |
第四步:噬菌体文库构建 | 构建噬菌粒 噬菌体文库构建 | VHH片段插入率≥75% 有效库容量≥108CFU/mL | |
第五步:噬菌体文库淘选 | 噬菌体展示纳米抗体,淘选,至少淘选两轮 阳性克隆的ELISA验证、鉴定、筛选和测序(200个克隆测序) 阳性克隆测序及测序结果分析 | 4-6周 | 保证至少 20 个序列 |