美研| CMC系列(九) 定量核磁那些事儿：定量核磁应用及其方法验证

2023-12-18

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开篇引言

核磁共振是基于特定原子核（主要为I=1/2的¹H、¹³C、¹⁵N、¹⁹F、³¹P等）在外磁场（1~21 Tesla，1 tesla=10⁴guass）中吸收了与其ᩚᩚᩚᩚᩚᩚ⁤⁤⁤⁤ᩚ⁤⁤⁤⁤ᩚ⁤⁤⁤⁤ᩚ𒀱ᩚᩚᩚ分裂能级间能量差相对应的射频场能量而产生共振的原理。核磁共振兼具定性分析及定量检测两种优势，广泛应用于化学、食品、药品等领域。

01 定量核磁原理与应用

参考值分析核磁技术设备（Quantitative Nuclear Magnetic，缩写QNMR)注意是鉴于1H-NMR，待测氧化物1H-NMR谱上各的数据峰难度之比相等特定的质子数之比，敲定氢的積分规则值和它的摩尔稀硫酸浓度正相关，参考值分析核磁方式分成比参考值分析法和一定参考值分析法。比参考值分析法是QNMR中最更简单的，借助更2种或2种往上有效成分特殊性峰的峰占地面积来敲定分量；一定参考值分析法是以型式和分量如图所示的氧化物为图案填充，与待测物合成稀硫酸去测量，借助更两者之间的的数据積分规则难度来敲定待测物的分量，一定参考值分析法会按照实验报告方式有差异又分成内标法、外标法和要求申请加入法。一定量核磁技术APP在医药学科技领域的APP有以上层面：

▲反应过程监测
▲对照品赋值
▲原料药含量测定
▲药物制剂的含量测定
▲药物的杂质检查
▲化合物纯度检查
▲多组分纯度确定
▲代谢组学研究
▲聚合物组成研究等。

定量核磁原理与应用.jpg

02 药典法规要求

2010版中国现代国现代药典二部附表中第三次提出核磁共震波谱法，2020版改成为四部通则0441核磁共震波谱法。USP实行版、EP 10.8版、JP第38版和中国现代国现代药典2050年版的NMR法通则网站内容做对比如表表一样。中国现代国现代药典2050年版0441通则涵盖原则、NMR仪、核磁共震谱、法测的方式四大部分。按量探讨中供给了相应按量的模式切换和相应按量的模式切换的供试品液体制法的方式、法测的方式和来计算公试，并简短例举了要关注的实验设计参数指标的设备及改善的项目。

内容

USP现行版<761>、<1761>

EP 10.8版2.2.33

JP 18版2.21

中国药典2020版0441

引言

简介、原理、适用范围

简介、原理

核磁仪器确认

DQ、IQ、PQ，系统适用性测试、确证测试

定义

共振、信号、波谱、模式、峰、线、跃迁

设备

磁体、探头(样品旋转、核磁共振管 )、控制台和计算机，仪器准备(磁体与场、探头调谐和匹配)

仪器组成(磁体、探头、控制台和计算机)、证明仪器正确工作的测试方法

FT-NMR波谱仪、连续波核磁共振(CW-NMR)波谱仪类型

仪器组成、仪器输出谱图的过程

测定方法

溶剂选择、样品处理

测定程序、样品处理

氢谱和碳谱的实验技术

溶剂选择、样品处理、样品检测

定性和定量分析

定性应用、定量应用(相对定量、绝对定量、外部校准、进一步的校准注意事项、一般程序、计量溯源性和标准物质的选择、样品制备、数据采集、数据处理、数据分析 )

定性分析、定量分析(内标法、规范化过程 )

定性和定量分析
•定性分析
•定量分析(绝对定量模式、相对定量模式)

采集参数

光谱宽度、停留时间、数据点数、采集时间、扫描次数、射频、接收器增益和脉冲宽度，后脉冲延迟，重复延迟

参数(脉冲宽度、死时间、采集时间、重复时间、接受增益 )

记录仪器和测定条件

采集后数据处理

增加信噪比或光谱分辨率、零填充、傅里叶变换定相、基线校正、采峰、积分、高级处理解

为定量目的优化采集和处理参数(数字分辨率、信噪比、整合区域、动态范围 )

NMR分析方法的验证和确认

生命周期方法的分析方法验证
•ATP
•第一阶段一方法设计 (分析方法开发、QRMMODR、复制策略、分析控制策略 )
•第二阶段一APPQ(APPQ程序、测量不确定度APPQ结果和文档)
•第三阶段一CPPV (日常监测、分析方法的变更)传统分析方法验证(准确度、精密度、专属性、工作范围、定量限、耐用性、溶液稳定性 )、分析方法确认

溶液核磁共振应用

结构解析和表征(示例 )、鉴别(示例)、定量(实验设计、样品制备、1D qNMR、2D qNMR )

使用化学位移、谱峰多重性和相对强度进行鉴别，使用标准品进行鉴别

SSNMR

MAS、高功率去耦和CP三种技术和应用

台式核磁共振仪

台式时域NMR仪、台式频域NMR仪、台式核磁共振应用

03 定量核磁方法开发思路

氘代试剂

▲ 待测物及内标物在选择气代化学试剂中是完全溶解度;▲ 注意待测物基本特征，不与气代化学药品情况现象;▲ 重要时要加入重水或TFA移除水峰不干扰。

内标物的选择

▲ 内标物的选由待测物出峰条件敲定;▲ 内标物酶联免疫法峰与待测物出峰不相同;▲ 特别关注内标有机化学学经营性质，不与待测物反映▲ 内标物原材料属性平稳，参考值峰峰型简洁

定量峰的选择

▲ 降钙素原检测峰与任何预警峰基线分离出来;▲ 一定量峰范围内离近，峰型贴近，规避基线创造的电磁波辐射;▲ 不选调皮区讯号峰看做酶联免疫法峰;▲ 一定要解决北斗卫星峰的扰乱。

样品的前处理

▲ 为减掉称样出现偏差的原因的使用精密加工更高的分享杆秤称样，一并称样量在10mg上文;▲ 只要样机轻快氢较多，可能加入适量重水、氘代甲醇等生化试剂取除轻快氢;▲ 印刷品几乎溶解出来是重要的。

采集参数设置

▲ 扫描拍摄频次:以确保按量峰的信噪比够;▲ 弛豫迟缓:保障抄袭打印时手机信号就能齐全弛豫，般为5倍上面的的T1;三角型形;▲ 脉冲造成的充分调动:O1P应在待测物和内标物手机信号频繁中，极大减少偏共振现象边际效应

实验数据处理

▲ 半自然积分换系统一半较自然积分换系统为准;▲ 以防定位峰各种基线上线下杂峰的要素;▲ 必要的时对基线、峰相位做出正畸，使峰型中心对称，减掉积分系统不确定度;▲ 内标物和待测物的化学发光法峰积分系统应更加类似。

误差分析

▲ 待测物和内标物降钙素原检测峰反映距离过大;▲ 称取粗差，更好保障仿品称取值少于天坪最低称取值的两倍之内;▲ 测量仪器技术参数的会后果，如嗡嗡声偏位、AQ配置不妥RG值配置过小等容易造成的会后果。

交付验收

▲ 出据各种相关查看报告书;▲ 请谅解所需印刷品也可以收回治理。

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